Der ROMEIS ist seit fast 100 Jahren das Standardwerk der mikroskopischen Technik. Über 18 Auflagen hat dieses Methodenbuch die Entwicklung der lichtmikroskopischen Verfahren begleitet und ist bis heute ein unverzichtbares Laborhandbuch für Wissenschaftler und Studierende, die auf den Gebieten der Cytologie, Histologie, mikroskopischen Anatomie, Pathologie und Histochemie forschen. Der Inhalt der 19. Auflage des ROMEIS wurde aktualisiert und um viele moderne Methoden und Anwendungen der Mikroskopie erweitert.

Unter der Herausgeberschaft von Privatdozentin Dr. Maria Mulisch und Professor Dr. med. Ulrich Welsch haben 24 Experten der Mikroskopie aus Forschung und Industrie ihre Erfahrung eingebracht, um dieses Werk zu einem Arbeitsbuch zu machen, auf das man sich beziehen und verlassen kann.

Herausgegeben von:

Dr. habil. Maria Mulisch, geb. 1952 in Braunschweig/Niedersachsen. 1973-1974 Studium der Philosophie in Heidelberg; 1974-1980 Studium der Biologie in Heidelberg; 1983 Promotion; 1993 Habilitation (Zoologie). Seit 2001 Leiterin der Zentralen Mikroskopie im Biologiezentrum der CAU Kiel. Forschungsschwerpunkt: Ultrastruktur pflanzlicher Zellen und Organellen; Arbeitsschwerpunkte: Licht- und elektronenmikroskopische Präparationen, Immunlokalisationen und Analysen an biologischen Proben, Durchführung von Lehrveranstaltungen für Studenten und Kursen für Anwender in den Bereichen Licht- und Elektronenmikroskopie.

Prof. Dr. rer. nat. Dr. med. Ulrich Welsch, derzeit am Institut für Zellbiologie der LMU München, geb. 1940 in Neustadt/Holstein. 1960--1966 Studium der Anglistik und Biologie in München und Kiel; 1974-1981 Studium der Humanmedizin in Kiel; 1983 Approbation. 1984 Vorstand des Lehrstuhls 2 (Cytologie, Histologie, Mikroskopische Anatomie) an der Anatomischen Anstalt der LMU München. Etwa 350 Originalarbeiten, u.a. zu den Themen: Vergleichende Mikroskopische Anatomie der Deuterostomier, mutabiles Bindegewebe der Echinodermen, Morphologie der Gymnophionen, Zellbiologie der Milch und der Milchdrüse. Er ist außerdem Autor des Lehrbuches Histologie, 4. Aufl. 2014.

Mit Beiträgen von:

Dr. Erna Aescht, Linz

Dr. Annegret Bäuerle, Hohenheim

Dr. Rolf T. Borlinghaus, Mannheim

Simone Büchl-Zimmermann, Augsburg

Dr. Anja Burmester, Reinfeld

Dr. Christine Desel, Kiel

Dr. Dennis Eggert, Hamburg

Dr. Christoph Hamers, Düsseldorf 

Dr. Guido Jach, Köln,

Dr. Manfred Kässens, Münster

Prof. Dr. Josef Makovitzky, Heidelberg

Dr. habil. Maria Mulisch, Kiel

Dr. Barbara Nixdorf-Bergweiler, Erlangen

Prof. Dr. Matthias Ochs, Hannover

Detlef Pütz, Düsseldorf

Dr. Rudolph Reimer, Hamburg

Bernd Riedelsheimer, München

Dr. Ulrich Sauer, München

Dr. Heinz Streble, Stuttgart

Dr. Frank van den Boom, Düsseldorf

Dr. Rainer Wegerhoff, Miesbach

Prof, Dr. med. Dr. rer nat. Ulrich Welsch, München

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Inhaltsverzeichnis

Mitwirkende	5
Benno Romeis (1888–1971)	6
Vorwort zur 19. Auflage	7
Vorwort zur 18. Auflage	8
Inhaltsverzeichnis	10
1. Mikroskopische Verfahren	16
1.1 Lichtmikroskopie	17
Einleitung	17
1.1.1 Die Geschichte des Mikroskops	17
1.1.2 Einführung in die Physik des Lichtes	18
1.1.3 Die Hauptkomponenten des Mikroskops	20
1.1.4 Wie entsteht die Vergrößerung	22
1.1.5 Die Objektive	23
1.1.6 Kondensoren für die Durchlichtmikroskopie	25
1.1.7 Grundsätzliche Einstellungen für die Mikroskopie	25
1.1.8 Die Köhlersche Beleuchtung	26
1.1.9 Kontrastmethoden	27
1.1.10 Relieferzeugende Kontrastmethoden	30
1.1.11 Stereomikroskopie	33
1.1.12 Fluoreszenzmikroskopie	34
1.1.13 Slide-Scanning-Mikroskopie	37
1.1.14 Konfokale Mikroskopie	37
1.1.15 Multiphotonenmikroskopie	39
1.1.16 TIRF	39
1.1.17 Luminiszenzmikroskopie	40
1.1.18 Light-sheet-Fluoreszenzmikroskopie	40
1.2 Elektronenmikroskopie	40
1.2.1 Einleitung	40
1.2.2 Transmissionselektronenmikroskopie	42
1.2.3 Elektronentomografie	47
1.2.4 EFTEM	48
1.2.5 REM und ESEM	49
1.2.6 Präparation für ESEM	55
1.2.7 Rastersondenmikroskopie	56
2. Hochauflösende Mikroskopie	58
2.1 Einleitung	59
2.1.1 Super-Resolution-Mikroskopie	59
2.2 Strukturierte Beleuchtung – SIM	60
2.3 Stochastische optische Rekonstruktionsmikroskopie (STORM)	62
2.3.1 Das STORM-Prinzip	63
2.3.2 Farbstoffe für STORM	64
2.3.3 Mehrfarben-STORM	66
2.3.4 3D-STORM	67
2.3.5 Lebendzell-STORM	67
2.3.6 Direkte stochastische optische Rekonstruktionsmikroskopie (dSTORM)	69
2.4 GSDIM: Depletion des Grundzustandes	70
2.4.1 Fluoreszenzzustände	70
2.4.2 Verarmung des Grundzustandes	71
2.4.3 3D-GSDIM	72
2.5 STED – Stimulierte Emissions-Depletion	72
2.5.1 Stimulierte Emission	72
2.5.2 Rastermikroskopie	72
2.5.3 Toroide Fokusformen	73
2.5.4 Die Überschreitung der Auflösungsgrenze	73
2.5.5 Lebendzell-STED-Mikroskopie	73
2.5.6 3D-STED	74
2.5.7 Präparationshinweise	75
2.6 Literatur	76
3. Probengewinnung zur mikroskopischen Untersuchung und Präparation	77
3.1 Abstrichpräparate	78
3.2 Ausstrichpräparate	78
3.2.1 Ausstriche von Zellsuspensionen	78
3.2.2 Organausstriche	80
3.3 Tupf- oder Abklatschpräparate	80
3.4 Isolationspräparate (Zupfpräparate)	80
3.5 Isolation von Zellen	80
3.5.1 Entnahme von adhärenten Zellen aus Zellkulturen	80
3.5.2 Anreicherung von Suspensionszellen	80
3.5.3 Zellsuspensionen von Epithelien	81
3.5.4 Herstellung von zellwandlosen Pflanzenzellen (Protoplasten)	81
3.5.5 Mazerationsmethoden von Zellverbänden	82
3.6 Isolation von Gewebeteilen	82
3.6.1 Biopsie	83
3.6.2 Native Schnitte	83
3.7 Isolation von Zellkompartimenten und Organellen	85
3.8 Trennen und Sortieren von Zellen	85
3.8.1 Durchflusscytometrie	85
3.8.2 Zelltrennung mit Hilfe paramagnetischer Kügelchen (beads)	86
3.9 Lasermikrodissektion	86
3.10 Literatur	90
4. Mikroskopische Untersuchungen von Lebendmaterial	91
4.1 Arbeiten mit Lebendmaterial	92
4.1.1 Voraussetzungen für das Arbeiten mit Lebendpräparaten	92
4.1.2 Präparationsbeispiele für die Herstellung von Lebendpräparaten	92
4.2 Durchführung von physiologischen Versuchen und Vitalfärbung	94
4.2.1 Einteilungen der Vitalfärbung	94
4.2.2 Eigenschaften von Vitalfarbstoffen	94
4.2.3 Vitalfarbstoffe für die Untersuchung in der Hellfeldmikroskopie	95
4.2.4 Nachweis reaktiver Sauerstoffspezies (ROS)	98
4.3 Literatur	99
4.4 Nachweisquellen und informative Links	99
5. Fixierungen für Licht- und Elektronenmikroskopie	100
5.1 Theorie der Fixierung	101
5.1.1 Strukturerhaltung	101
5.1.2 Nachweise	101
5.2 Fixierungsverfahren	101
5.2.1 Physikalische Fixierung	101
5.2.2 Chemische Fixierung	102
5.2.3 Fixierungsbedingungen und Anforderungen an die Präparate	106
5.2.4 Praxis der Fixierung für die Lichtmikroskopie	107
5.2.5 Praxis der Fixierung für die Elektronenmikroskopie	108
5.2.6 Beispielhafte Anleitungen	109
5.2.7 Aufbewahrung von fixiertem Material	110
5.2.8 Fixierungs- und Einbettautomaten	111
5.3 Literatur	111
6. Schnittpräparation für die Lichtmikroskopie	112
6.1 Einbettung	113
6.1.1 Allgemeines	113
6.1.2 Auswaschen des Fixierungsmittels aus den Präparaten	113
6.1.3 Entwässern der Präparate	113
6.1.4 Einbringen der Präparate in ein Intermedium (Zwischenflüssigkeit)	115
6.1.5 Durchtränken der Präparate mit dem Einbettmittel	116
6.1.6 Ausgießen (in Blöcke gießen) der Präparate im Einbettmittel	116
6.1.7 Aushärten der Blöcke:	117
6.2 Einbettzubehör	118
6.2.1 Zubehör für die Einbettung von Hand	118
6.2.2 Einbettautomaten	118
6.2.3 Paraffinspender/Ausgießstation	118
6.3 Einbettprotokolle	119
6.3.1 Paraffineinbettung	119
6.3.2 Kunststoffeinbettung	122
6.3.3 Celloidineinbettung	124
6.3.4 Einbettung in Celloidin-Paraffin	126
6.3.5 Agareinbettung	126
6.4 Mikrotome und Mikrotomie	127
6.4.1 Mikrotomtypen	128
6.4.2 Messerarten und deren Anwendungsgebiete	129
6.4.3 Stellung des Mikrotommessers beim Schneiden am Schlitten- und Rotationsmikrotom	130
6.4.4 Schneidetechnik am Mikrotom	131
6.5 Leitfaden zur Beurteilung der Präparation	132
6.5.1 Probleme und Artefakte bei der Schnittpräparation und ihre Abhilfe	132
6.5.2 Beurteilung von Artefakten im Präparat	132
6.6 Literatur	133
7. Präparation für die TEM	134
7.1 Schnittpräparation	135
7.1.1 Fixierung	135
7.1.2 Waschen	135
7.1.3 Entwässern und Einbetten	135
7.1.4 Ultramikrotomie	141
7.2 Kontrastierungstechniken für die Transmissionselektronenmikroskopie (TEM)	149
7.2.1 Einführung	149
7.2.2 Negativkontrastierung	149
7.2.3 Bedampfung	151
7.2.4 Positive Kontrastierungen	152
7.3 Literatur	157
7.3.1 Zusammenfassende Literatur	157
7.3.2 Einzelpublikationen	157
8. Präparation für die konventionelle Rasterelektronenmikroskopie (REM)	158
8.1 Präparate für die REM	159
8.2 Präparationsschritte	159
8.2.1 Reinigung	159
8.2.2 Stabilisierung	160
8.2.3 Freilegen interner Strukturen	160
8.2.4 Abdruckverfahren	161
8.2.5 Trocknung	161
8.2.6 Befestigen der Präparate	162
8.2.7 Sputtern	162
8.2.8 Techniken für stark zerklüftete Objekte oder hohe Auflösung	163
8.2.9 Aufbewahrung der Präparate	164
8.3 Artefakte	164
8.4 Literatur	164
9. Kryotechniken	166
9.1 Einleitung	167
9.2 Kryopräparation für die Lichtmikroskopie	168
9.2.1 Kryostatschnitte	169
9.2.2 Einfrieren der Proben	169
9.3 Kryopräparation für die Elektronenmikroskopie	171
9.3.1 PLT	172
9.3.2 Einfrieren der Proben	172
9.3.3 Gefriersubstitution	176
9.3.4 Gefrierbruch und Gefrierätzung	178
9.3.5 Gefrierschnitte	178
9.4 Kryo-Elektronenmikroskopie	182
9.5 Literatur	183
10. Färbungen	184
10.1 Allgemeines zur Färbung	185
10.2 Farbstoffe	185
10.2.1 Der sichtbare Anteil des Spektrums, Farben und Licht siehe Kapitel 1.1.2	185
10.2.2 Klassifizierung von Farbstoffen	185
10.2.3 Wichtige Farbstoffe	186
10.2.4 Ladung der Farbstoffe	186
10.2.5 Färbevokabular	188
10.2.6 Färbetheorien	189
10.3 Herstellen der Farblösungen	190
10.4 Färbezubehör	190
10.4.1 Färbeküvetten	190
10.4.2 Färbebänke, Tropfflaschen und sonstiges Zubehör	191
10.4.3 Färbeautomaten	191
10.5 Behandlung der Schnitte vor und nach dem Färben	192
10.5.1 Schnittmontage und Trocknung	192
10.5.2 Beschichtungsmöglichkeiten der Objektträger	193
10.5.3 Behandlung der Schnitte unmittelbar vor der Anfärbung	194
10.5.4 Behandlung der Schnitte nach der Färbung	195
10.6 Färbemethoden	199
10.6.1 Kernfarbstoffe und Kernfärbungen	199
10.6.2 Cytoplasmafarbstoffe und Cytoplasmafärbungen	206
10.6.3 Fluoreszenzfarbstoffe	208
10.6.4 Pigmente	208
10.6.5 Basophilie	211
10.6.6 Metachromasie	212
10.6.7 Übersichtsfärbungen	214
10.6.8 Schnellfärbungen	215
10.6.9 Bindegewebefärbungen	216
10.6.10 Stoffnachweise	227
10.6.11 Nachweis von DNA (Desoxyribonucleinsäure)	242
10.6.12 Darstellung von Bakterien, Pilzen, und Protozoen im histologischen Schnitt	244
10.6.13 Darstellung von Blutzellen im histologischen Schnitt	249
10.6.14 Darstellung des Nervengewebes	250
10.6.15 Färbungen an Kunststoffschnitten	268
10.6.16 Stückfärbung	270
10.6.17 Medizinische Cytodiagnostik	270
10.7 Artefakte	281
10.8 Herstellen mikroskopischer Injektions- und Korrosionspräparate	281
10.8.1 Injektionspräparate	282
10.8.2 Korrosionspräparate	284
10.9 Einsatz der Polarisationsmikroskopie für die medizinische Diagnostik	286
10.9.1 Grundlagen der Polarisationsmikroskopie	287
10.9.2 Topo-optische Reaktionen	287
10.10 Literatur	292
10.10.1 Literatur zu Kapitel 10.9	294
11. Fluoreszenzfärbungen	296
11.1 Einführung	297
11.2 Fluorochrome	297
11.2.1 Primärfluoreszenz (Autofluoreszenz)	298
11.2.2 Sekundärfluoreszenz (Fluorochromierung)	300
11.2.3 Mehrfach-Fluorochromierung	300
11.2.4 Anleitungen für einfache Fluoreszenzfärbungen	300
11.2.5 Probleme bei der Fluoreszenzmikroskopie	304
11.3 Live-Cell Imaging	305
11.3.1 Probleme beim Live-Cell Imaging	305
11.3.2 Fluorochrome zum Life-Cell Imaging	306
11.4 Literatur	310
12. Präparationstechniken und Färbungen von speziellen Geweben	312
12.1 Präparation spezieller Gewebe	313
12.1.1 Paraffineinbettung von großen Objekten	313
12.1.2 Bearbeitung (Fixierung, Einbettung und z. T. Färbung) spezieller Organe	313
12.2 Präparation von Hartgewebe für die Histologie	322
12.2.1 Allgemeines	322
12.2.2 Präparationsmöglichkeiten	323
12.2.3 Fixierung von Hartgewebe	323
12.2.4 Entkalkung	324
12.2.5 Kunststoffeinbettung	326
12.2.6 Schliffherstellung ohne Vorbehandlung	327
12.2.7 Mazeration von Skelettteilen	328
12.3 Literatur	328
13. Neuronale Tracer und ihre Anwendungen (Neuronales Tracing)	329
13.1 Retrograde und anterograde Tracer	330
13.1.1 Retrograde Tracer	330
13.1.2 Anterograde Tracer	332
13.1.3 Tracer, die sowohl anterograd als auch retrograd laufen	332
13.1.4 Lösen, Haltbarkeit und Lagerung der Tracersubstanzen	332
13.1.5 Auswahl des Tracers für ein Experiment	332
13.2 Allgemeiner Ablauf eines Versuchs	332
13.3 Techniken zur Tracer-Applikation	332
13.3.1 Kristalline Anwendung	332
13.3.2 Druckapplikation	333
13.3.3 Iontophoretische Injektion	334
13.4 Perfusionskammer für in vitro-Farbstoffapplikationen	336
13.5 Farbstoffapplikationen in der Interface-Kammer	338
13.6 Anwendungsbeispiele für Tracer-Applikationen	340
13.6.1 Fluoro Ruby® (FR)	340
13.6.2 Biotinylierte Dextranamine (BDA)	344
13.6.3 Choleratoxin B (CTB)	346
13.6.4 Phaseolus vulgaris Leucoagglutinin (PHA-L)	347
13.6.5 Biocytin, Neurobiotin	348
13.6.6 Carbocyanine (Lucifer Yellow, DiI, DiO, DiA)	352
13.7 Literatur	353
14. Spezielle Präparationsmethoden für tierische Organsysteme und Gewebe	355
14.1 Einführung	356
14.2 Totalpräparation des Zentralnervensystems (ZNS) von Knochenfischen (Teleostei)	356
14.3 Herstellung chitinhaltiger Präparate – Bleich- und Mazerationsmethode	356
14.4 Totalpräparate kleiner zoologischer Objekte	359
14.5 Darstellung von Knorpel und Knochen kleiner Wirbeltiere	360
14.6 Literatur	361
15. Präparationstechniken und Färbungen von Protozoen und Wirbellosen für die Lichtmikroskopie	362
15.1 Einführung	363
15.2 Besonderheiten der Untersuchung	365
15.2.1 Bedeutung der Lebendbeobachtung	365
15.2.2 Herabsetzen der Beweglichkeit von Mikroorganismen	365
15.2.3 Vital- und Supravitalfärbungen	365
15.2.4 Betäubung	366
15.2.5 Vorfixierung („Räucherungsmethoden“)	366
15.2.6 Fixieren	369
15.2.7 Vorbehandlung von Weich- und Hartsubstanzen	371
15.2.8 Bemerkungen zu den Organismengruppen	372
15.3 Literatur	382
15.3.1 Originalartikel	382
15.3.2 Zusammenfassende Literatur	382
16. Präparationstechniken und Färbungen von Pflanzengewebe für die Lichtmikroskopie	384
16.1 Einführung	385
16.2 Mikroskopische Technik = Mikrotechnik	385
16.2.1 Vorbereitung des Untersuchungsmaterials	385
16.2.2 Wahl des Präparates	385
16.2.3 Fixierung	390
16.2.4 Fixierflüssigkeiten	390
16.3 Weiterverarbeitung des fixierten Materials	391
16.3.1 Konservierung	391
16.3.2 Mazeration	391
16.4 Herstellen von lichtmikroskopischen Präparaten	392
16.4.1 Basismaterialien zur Herstellung mikroskopischer Präparate	392
16.4.2 Schnitttechnik	392
16.4.3 Weiterverarbeitung des Schnittes zu einem lichtmikroskopischen Präparat	393
16.5 Ausgewählte Färbevorschriften	395
16.6 Hämatoxylinlösungen	395
16.7 Einschlussmittel für Dauerpräparate	400
16.7.1 Wasserlösliche Einschlussmedien	401
16.7.2 Wasserunlösliche Einschlussmittel	401
16.8 Literatur	402
17. Cytogenetik	403
17.1 Allgemeines	404
17.2 Chromosomenspreitung	404
17.3 Chromosomenfärbungen	405
17.3.1 Färbung mit Milchsäure-Orcein	405
17.3.2 Q-Bänderung mit Quinacrin	405
17.3.3 Q-Bänderung mit Hoechst 33258	406
17.3.4 Distamycin A/DAPI- (DA/DAPI-)Färbung	406
17.3.5 C-Bänderung mit Giemsa-Färbung	407
17.3.6 G-Bänderung mit Giemsa-Färbung	407
17.4 Fluorochromierung	407
17.5 Histonnachweis	407
17.5.1 Fast Green FCF für Histone	408
17.5.2 Dansylchlorid	408
17.6 Extraktionsmethoden für Nucleinsäuren	408
17.6.1 Säureextraktion	408
17.6.2 Enzymatische Extraktion	409
17.7 Literatur	409
18. Enzymhistochemie	410
18.1 Allgemeines	411
18.1.1 Gewebevorbehandlung	411
18.2 Ausgewählte Methoden von Enzymnachweisen	413
18.2.1 Phosphatasen	413
18.2.2 Carboxylesterhydrolasen	417
18.2.3 Oxidasen, Peroxidasen	419
18.2.4 Dehydrogenasen	420
18.2.5 Transferasen	422
18.2.6 Lyasen	423
18.3 Literatur	423
19. Immunlokalisation	425
19.1 Einführung	426
19.1.1 Grundlagen	426
19.1.2 Aufbau und Eigenschaften von Antikörpern	426
19.2 Herkunft, Auswahl, Überprüfung und Reinigung von Antikörpern	427
19.2.1 Herstellung von Antikörpern	427
19.2.2 Reinigung von Antikörpern	430
19.2.3 Antikörperkonzentrationen	431
19.2.4 Lagerung von Antikörpern	431
19.3 Nachweismethoden und Detektion	431
19.3.1 Direkte und indirekte Immunmarkierung	431
19.3.2 Auswahl der Antikörper	432
19.3.3 Indirekte Immunmarkierung über Protein A	432
19.3.4 Die (Strept-)Avidin-Biotin-(ABC-)Technik	433
19.3.5 Lokalisation mehrerer Antigene	433
19.3.6 Detektion	434
19.4 Anforderungen an die Präparate	439
19.4.1 Whole mount-Immunmarkierung und preembedding-Verfahren	439
19.4.2 Markierung an Schnitten	439
19.4.3 Durchführung der Immunmarkierung	440
19.5 Kontrollen und Problembehandlung	443
19.5.1 Positiv- und Negativkontrollen	443
19.5.2 Antigendemaskierung	443
19.6 Lokalisation von Molekülen mit Hilfe Antikörper-ähnlicher Nachweissysteme	445
19.7 Ausgewählte Anleitungen	445
19.7.1 Affinitätsreinigung von Antikörpern	446
19.7.2 Antigendemaskierung	446
19.7.3 Antigendemaskierung für die Immunelektronenmikroskopie	448
19.7.4 Immunhistologische Markierungen	448
19.7.5 Immunmarkierungen für die Elektronenmikroskopie	449
19.7.6 Immunmarkierungen für Licht- und Elektronenmikroskopie	450
19.7.7 Silberverstärkung	450
19.8 Literatur	451
19.8.1 Originalartikel	451
19.8.2 Zusammenfassende Literatur	451
20. in situ-Hybridisierung	452
20.1 Einleitung	453
20.1.1 Prinzip	453
20.1.2 DNA:DNA-in situ-Hybridisierung	454
20.1.3 RNA:RNA-in situ-Hybridisierung	456
20.2 Sonden	456
20.2.1 DNA-Sonden	457
20.2.2 RNA-Sonden	458
20.2.3 Sonden für Bakterien- oder Virussequenzen	459
20.3 Markierung der Sonden	459
20.4 Anforderungen an die Präparate	459
20.5 Präparation von Chromosomen und Zellkernen	460
20.6 Vorbehandlung der Präparate	460
20.7 Denaturierung der Nucleinsäuren	461
20.8 Hybridisierung	461
20.8.1 Spezifität der Hybridisierung	461
20.8.2 Stringenz	461
20.8.3 Verminderung von unspezifischer Hintergrundmarkierung	461
20.8.4 Hybridisierungskinetik	462
20.8.5 Kontrollen	462
20.9 Laborausstattung und Reagenzien	462
20.9.1 Ausstattung	463
20.9.2 Reagenzienqualität und -Handhabung	463
20.10 Arbeitsvorschriften	463
20.10.1 Vorbereitungen	464
20.11 Probleme und Fehlerquellen	477
20.12 Literatur	479
20.13 Internetforen	480
20.14 Bücher	480
21. Tissue-Printing	481
21.1 Einführung	482
21.2 Generelle Methodik des Tissue-Printing	482
21.3 Tissue-Prints von zartem Gewebe mit Hilfe von Kryostatschnitten	483
21.4 Nachweise an Tissue-Prints	484
21.4.1 Western-Tissue-Print	484
21.4.2 Northern-Tissue-Print	486
21.4.3 Lokalisation von Enzymaktivität am Tissue-Print	487
21.5 Literatur	488
21.5.1 Originalartikel	488
21.5.2 Zusammenfassende Literatur	488
22. Reporterproteine	489
22.1 Einleitung	490
22.1.1 Enzymatische und lichterzeugende Reporter	490
22.1.2 Chemilumineszenz oder Fluoreszenz?	492
22.1.3 Zur Geschichte der FP	492
22.1.4 Grundlegendes zu fluoreszierenden Proteinen	492
22.2 Fluoreszierende Reporter in der Anwendung	495
22.2.1 Konstruktion geeigneter Expressionsvektoren	495
22.2.2 Transiente und stabile Genexpression	496
22.2.3 Analyse durch Fluoreszenzmikroskopie	497
22.3 Literatur	500
23. Qualitative und Quantitative Analyse in der Mikroskopie	501
23.1 Einleitung	502
23.2 Erstellung mikroskopischer Bilder	502
23.2.1 Digitale Kameras	502
23.2.2 Bilddarstellung bei digitalen Schwarz-Weiß- oder Farbkameras	503
23.2.3 Das Nyquist-Theorem	505
23.2.4 Verwendung des adäquaten Kameraadapters	505
23.2.5 Kalibrierung	506
23.2.6 Bildformate und Komprimierung	506
23.3 Bildanalyse	506
23.3.1 Konventionelle Verfahren zur Bildanalyse	506
23.3.2 Digitale Analyse	507
23.4 Automatisierte Experimentdurchführung mit motorisierten Mikroskopen	510
23.4.1 Motorische Komponenten	510
23.4.2 Mehrdimensionale Mikroskopie	511
23.4.3 Lebendzellmikroskopie	511
23.5 Ausgewählte Verfahren in der modernen Fluoreszenzmikroskopie	512
23.5.1 Quantifizierung von Fluoreszenzsignalen	512
23.5.2 Co-Lokalisation	513
23.5.3 Untersuchung der Proteindynamik in lebenden Zellen mit Hilfe fluoreszierender Proteine	514
23.5.4 FRET	516
23.5.5 Quantitative und qualitative Analyse des Fluoreszenzspektrums	517
23.5.6 Quantitative Analyse von Ionenkonzentrationen / Ratio Imaging	519
23.6 Bezugs- und Informationsquellen für Software und Analysemodule	520
23.7 Literatur	520
24. Morphometrie in der Mikroskopie: stereologische Methoden	521
24.1 Einführung	522
24.1.1 Warum Morphometrie?	522
24.1.2 Stereologie	522
24.2 Voraussetzungen	524
24.3 Methoden	525
24.3.1 Bestimmung des Referenzraumes	525
24.3.2 Probenauswahl (Sampling)	526
24.3.3 Ausgewählte Messungen	526
24.4 Literatur	529
25. Arbeitsschutz und Sicherheit im Labor	531
25.1 Einführung	532
25.2 Gefährdungsbeurteilung	532
25.3 Allgemeine Grundregeln	532
25.4 Sicherheitstechnische Laborausstattung	533
25.5 Notfalleinrichtungen	533
25.6 Persönliche Schutzausrüstung	533
25.7 Hautschutz/Hautschutzplan	534
25.8 Umgang mit Untersuchungsmaterial	534
25.9 Desinfektion	534
25.10 Gefahrstoffe	534
25.10.1 GHS (Global Harmonisiertes System) oder CLP (Classification, Labelling, Packaging)	534
25.10.2 Kennzeichnung von Gefahrstoffen	536
25.10.3 Aufbewahrung, Umgang und Transport von Gefahrstoffen	538
25.10.4 Aufnahmewege von Gefahrstoffen	540
25.10.5 Freisetzung von Gefahrstoffen	540
25.10.6 Gefahrstoffverzeichnis	540
25.10.7 Sicherheitsdatenblätter	541
25.10.8 Betriebsanweisung	541
25.10.9 Unterweisung	541
25.11 Umgang mit Laborabfällen	541
25.12 Umgang mit Mikrotommessern	541
25.13 Brandschutz	541
25.14 Infos zum Arbeitsschutz und GHS/CLP	543
25.15 Literatur	543
Anhang 1	544
Tabellen	545
Beispielhafte Programme für die Fixierung und Einbettung für die TEM im Einbettautomaten	572
Anhang 2	576
Aktuelle Bücher zu mikroskopischen Techniken	577
Anhang 3	580
Liste der Anleitungen	581
Index	587